Comparison of flagellin and an oil-emulsion adjuvant in inactivated Newcastle disease vaccine in stimulation of immunogenic parameters

The present study was designed to investigate the potential application of native (N) and recombinant (truncated modified [tmFliC] and full-length [flFliC]) flagellin proteins along with inactivated Newcastle disease virus (NDV). Fifty six SPF chickens were immunized twice with PBS (control), inactivated NDV (Ag), inactivated NDV/flFliC (AgF), inactivated NDV/tmFliC (AgT), inactivated NDV/N (AgN), commercial vaccine containing Montanide (Vac) and Vac/N (VacN), with a two-week interval. Blood was collected weekly and spleens were harvested after chickens were sacrificed. Interleukin-6 (IL-6) and tumor necrotic factor-α (TNF-α) gene expression in peripheral blood mononuclear cells were analyzed by Real-Time PCR. Antibody response was assessed by haemagglutination inhibition (HI). Cellular activity was quantified by MTT assay. Results showed that the most IL-6 and TNF-α gene expression was observed in AgF group (P < 0.01). The lowest gene expression among vaccinated groups was observed in Ag group for IL-6 and Ag and Vac group for TNF-α. The highest HI titer was observed in Vac, VacN, AgF and AgT groups. The AgF group showed the highest cellular activity (P < 0.01). In conclusion, flagellin-adjuvanted groups showed a pro-inflammatory effect and acted similarly to or better than the Vac group. Hence, flagellin can be proposed as a potential adjuvant for ND vaccine.     

北京地区南瓜病毒病病原种类鉴定

为明确北京地区南瓜病毒病种类及其主要侵染病原,2016~2017年在北京周边采集疑似感染病毒的南瓜病样84份,并根据南瓜上的6种病毒特异性引物对其进行反转录PCR(RT-PCR)检测。结果表明:共有79份南瓜病样检测显示阳性,其中黄瓜花叶病毒(Cucumber mosaic virus,CMV)的检出率最高,为52.38%;其次是小西葫芦黄花叶病毒(Zucchini yellow mosaic virus,ZYMV)和西瓜花叶病毒(Watermelon mosaic virus,WMV),检出率分别为44.01%、14.29%,其他病毒暂未检出。此外,16.67%的样品受2种病毒复合侵染,CMV和ZYMV复合侵染占7.14%,ZYMV和WMV复合侵染占9.52%。北京地区南瓜上优势病毒种类为CMV,且存在病毒复合侵染现象。     

猫鼻气管炎病毒、怀状病毒、泛白细胞减少症病毒的分离及其其形态学观察

根据病毒的理化特性，从猫三联活疫苗中分离出猫鼻气管炎、猫西洋太和猫泛白细胞减少症病毒；筛选出每种病毒敏感的细胞，并将该3种病毒分别分别在其中传代与扩增；通过电镜观察此3种病毒的形态学特征及其在宿主细胞内增殖部位、分布情况等，并以此对猫3种病毒进行了初步鉴定。     

鸡新城疫病毒F基因和鸡IL—2重组DNA疫苗的构建

利用已克隆到的新城疫D26株F基因和鸡IL－2基因，经过载体改建，将他们共同克隆于真核表达质粒pCDNA3上，经酶切分析、PCR鉴定证实成功构建了共表达鸡新城疫病毒F基因和鸡IL－2的重组质粒，为探讨禽类重组基因疫苗的构建及鸡IL－2在基因疫苗中的作用奠定了基础。     

我国部分地区ＮＤＶ的分子流行病学研究

本研究根据新城疫病毒（ＮＤＶ）Ｆ基因编码区１－３７４位核苷酸序列计算其遗传距离并给出了ＮＤＶ的系统发育进化树，将６８株ＮＤＶ分为９个基因型（３０株为国内分离株），其中Ⅰ－Ⅵ是早已存在的老基因型，Ⅶ、Ⅷ、Ⅸ为新发现的基因型，特别是Ⅸ为我国特有的基因型（Ｆ４８ＥＯ、Ｍ３、ＨＬＪ－３、ＨeB-1P和ＮＭ－５）。１９９７－１９９９年我国云南、广西、甘肃、陕西、新疆等地分离的ＹＮ－１Ｐ、ＧＸ－３、Ｈ１、Ｈ２、Ｐ１、ＧＸ－１、ＧＸ－２、ＧＳ－３、ＳＨＸ－２、ＳＨＸ－３、ＳＨＸ－６、ＳＨＸ－７、ＸＪ－２和１９９１年分离的ＨuB-1均属于Ⅶ基因型，该基因型的病毒是９０年以来引起新城疫发生的主要病原。根据遗传距离和分离年代可将此基因型进一步划分为５个基因亚型，分别是Ⅶa、Ⅶb、Ⅶc、Ⅶd和Ⅶe。此外ＨuN-1/98、HLJ-4/95和ＨeH-1P属一个老的基因Ⅵ，１９７９－１９８５年分离自青海的ＱＨ－１、ＱＨ－２、ＱＨ－４属于一个新的基因型－Ⅷ型。可见在我国新城疫的流行是极其复杂的，既有老基因型的危害（Ⅰ－Ⅵ），又有新基因型（Ⅶ）的流行，更有我国独特Ⅷ和Ⅸ基因潜伏。     

内蒙古山羊流产病毒的特性研究

1990－1992年从野外山羊流产的胎儿中分离到2株病毒。1994年又从野外自然流产的山羊胎盘中分离到1株病毒。用琼脂扩散试验做交叉反应，证明3株分离病毒属于同一种病毒。用FUDR抑制试验鉴定其核酸型为RNA，在电镜下为圆形颗粒，直径约60－70mm，其能在BHK21，Vero细胞上和鸡胚中增殖，产生明显的CPE。将其回归孕山羊，引起51．2％（21／41）流产。研制的福氏完全佐剂灭活苗初试与对照比较，可使流产降低46％，血清学反应证实其与BTV，IBARKIV，EHDV，AKBV无相关性。     

新城疫（ND）—减蛋综合征（EDS76）蜂胶二联灭活疫苗的研制Ⅰ．制苗工艺、疫苗安全性和免疫原性试验

将新城疫病毒（NDV）Colon-30株和减蛋综合征病毒（EDS76AV）－127株分别接种于非免疫鸡胚和鸭胚，制备抗原液。抗原液经甲醛灭活后，与纯化的天然免疫增强剂蜂胶乳化，制成鸡新城疫（ND）－减蛋综合征（EDS76）蜂胶二联灭活疫苗，对疫苗的安全性和免疫原性进行了测定。对3－6周龄易感雏鸡以2倍使用剂量肌内注射，安全性良好；对1日龄雏鸡接种1个使用剂量进行急性毒性试验。15d生长曲线表明，对雏难 影响。对6周龄雏鸡注射1个使用剂量，每批疫苗免疫10只鸡，免疫后5－32d，鸡血清中EDS76血凝抑制（HI）抗体的几何平均滴度（GMT）为6．5－11．8log2,ND血凝抑制（HI）抗体的几何平均滴度（GMT）为4．8－9．8log2；对ND免疫攻毒试验表明，3批疫苗，每羽份含有的半数保护量（PD50）分别为≥127、≥131和≥127。     

VSV的RT-PCR快速检测方法的建立

选取水泡性口炎病毒 N基因序列 ,设计 1对引物 ,建立检测水泡性口炎病毒的 RT- PCR方法。对VSV各毒株进行检测 ,结果均为阳性 ,而对反刍动物病毒性疾病相关病毒进行检测 ,结果均为阴性。结果表明所建立的 RT- PCR技术可用于水泡性口炎的诊断和流行病学调查     

传染性牛鼻气管炎亚单位疫苗免疫原性的研究

用犊牛睾丸细胞培养传染性牛鼻气管炎病毒（IBRV），反复冻融，差速离心提取病毒，用Triton X-100溶解，超声波处理，制成IBRV TritonX-100亚单位抗原，经SDS－PAGE电泳，其分子量在176kD-53kD之间，其中有6条清晰的蛋白带。该抗原与一定比例的白油－司盘佐剂乳化，接种育成年，经间接ELISA检测，可使接种的育成牛产生高效价的血清抗体（OD492mm=1.57)。2种不同剂量（80mg/头，40mg／头）的IBRV亚单位疫苗接种育成牛，体内抗体效价相差不显著，抗体可在体内持续12周，用IBRV TrionX-100亚单位疫苗2次接种育成牛，其体内抗体效价显著高于用灭活疫苗2次接种育成牛体内的效价。试验结果表明：提取的IBRV多肽制作的亚单位疫苗具有良好的免疫原性，且抗体持续时间较长。     

应用生物素标记的NDV－cDNA探针检测感染尿囊液中NDV－RNA的初步研究

本文应用聚合酶链反应（ＰＣＲ）技术从构建的新城疫病毒（ＮＤＶ）ｃＤＮＡ文库中扩增含编码Ｆ糖蛋白前体──Ｆｏ酶切位点序列的３５９ｂｐ的Ｆ蛋白基因ｃＤＮＡ片段。将此３５９ｂｐｃＤＮＡ片段经光敏生物素标记后,即成ＮＤＶ－ｃＤＮＡ探针。该探针能特异性地从感染的尿囊液中检测出ＮＤＶ强毒株和疫苗毒株的基因组ＲＮＡ,而不与ＩＢＤｖ－ｄｓＲＮＡ、ＡＩＢｖ－ｓｓＲＮＡ、ＥＤＳ７６－ｄｓＤＮＡ、ＭＤＶ－ｄｓＤＮＡ,ＦＰＶ－ｄｓＲＮＡ及ＡＩＬＶ－ｄｓＤＮＡ发生交叉杂交反应。试验结果表明：尽管该探钎含有编码Ｆｏ蛋白酶切位点序列的碱基顺序,但它还是不能把ＮＤＶ的强、弱毒株区分开。这说明ＮＤＶ强、弱毒株比区域内的碱基存在着相当大的同源性。不过,此探针对ＮＤＶ来说具有特异性,这就为ＮＤＶ的诊断技术开创了基因水平检测的新途径。